Аналіз ПЦР: що це таке? Як правильно здавати аналіз ПЦР

Не так давно був розроблений надійний, високочутливий і швидкий метод діагностики різних інфекційних захворювань людини. Такий спосіб має назву «аналіз ПЦР». Що це таке, в чому його сутність, які він може виявити мікроорганізми і як правильно його здавати, ми розповімо в нашій статті.

Історія відкриття

Винайшов спосіб полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) американський вчений Кері Мюлліса в 1983 р Спочатку запатентований метод діагностики компанією "Цетус Корпорейшн", в якій і працював його творець. Але в 1992 р усі права та патенти були продані компанії "Хоффман-Ля Рош". Після чого виявилося, що паралельно схожі дослідження проводилися і були зафіксовані іншими американськими біологами, такими як Еліс Чен, Девід Едгар, Джон трелі. У 1980 р займалися даною проблемою і радянські вчені А. Слюсаренко, А. Каледін і С. Городецький. Тому визначити єдиного правовласника виявилося неможливим. Багато видатних біохіміки внесли певний внесок у розробку методики полімеразної ЦЕРН реакції і запатентували свої нововведення. На даний момент аналіз методом ПЛР проводять повсюдно в спеціально обладнаних лабораторіях.

Суть методу ПЛР-діагностики

Аналіз ПЦР: що це таке і як він працює? Суть методу полягає в тому, щоб за допомогою спеціального ферменту ДНК-полімерази в штучних умовах збільшити в обсязі певну мікробну середу. Для цього багаторазово примножують наявний ДНК-матеріал. Таким чином, при наявності патогенного мікроорганізму в зразку його кількість буде збільшена за рахунок біохімічних лабораторних маніпуляцій, і бактерію не складе труднощів виявити в мікроскоп.

Як проводиться дослідження матеріалу?

Для проведення аналізу потрібно:

• ДНК-матриця;
• праймери, з`єднують кінці фрагмента матеріалу;
• термостійкий фермент ДНК-полімерази;
• хімічні речовини, забезпечують правильну роботу ферментов;
• буферний розчин, необхідний для створення відповідних умов для росту і розвитку ДНК-матеріалу.

  

Для виконання ПЛР виконують 25-30 повторів, що складаються з трьох стадій: денатурації, відпалу та елонгації.

Для аналізу полімезарной ланцюгової реакції використовують спеціальний прилад - ампліфікатор. Сучасне обладнання дозволяє встановлювати необхідну програму нагрівання та охолодження пробірок для усунення помилок під час проведення діагностики.

Де застосовують діагностику?

Метод полімезарной ланцюгової реакції використовують у різних областях медицини:

• криміналісти з його допомогою ідентифікують генетичний матеріал, наприклад волосся, слину або кров;
• аналіз крові ПЛР допомагає при генотипуванні, наприклад для виявлення індивідуальної генетично закладеної реакції на певний лікарський препарат;
• за допомогою такого методу встановлюють наявність родинних зв`язків між людьми;
• самим затребуваним ПЛР-метод став у медичній діагностиці для визначення різних інфекційних захворювань.

Які інфекції виявляє ПЛР?

Отже, медицина давно і успішно використовує аналіз ПЦР. Що це таке, ми вже дізналися. А яких збудників можна виявити з його допомогою? Методом ПЛР діагностуються наступні інфекційні захворювання:

• гепатити А, В, С
• уреаплазмоз;
• кандідоз;
• хламідіоз;
• мікоплазмоз;
• гарднереллез;
• інфекційний мононуклеоз;
• тріхомоніаз;
• папіломавірусна інфекція;
• туберкулез;
• герпесная інфекція 1-го і 2-го типів;
• хелікобактеріоз;
• цітомегаловірус;
• діфтерія;
• сальмонеллез;
• ВІЛ-інфекція.
  
  
  

  

Також методи ПЛР використовуються в діагностиці онкозахворювань.

Переваги методу

Діагностика ПЛР має ряд переваг:

1. Висока чутливість. Навіть при наявності всього декількох молекул ДНК мікроорганізму аналіз ПЦР визначає наявність інфекції. Допоможе метод при хронічних і латентно протікають захворюваннях. Часто в таких випадках мікроорганізм є некультівіруемих іншими способами.
2. Для дослідження підходить будь-який матеріал, наприклад слина, кров, статеві виділення, волосся, клітини епітелію. Найбільш поширеним є аналіз крові та урогенітального мазка на ПЛР.

   

3. Не потрібно тривалого вирощування культур. Автоматизований процес проведення діагностики дозволяє отримати результати дослідження через 4-5 годин.
4. Метод є практично стовідсотково достовірним. Зафіксовані лише поодинокі випадки помилково негативні результати.
5. Можливість визначити кілька видів збудників з однієї проби матеріалу. Це не тільки прискорює процес діагностики захворювання, але й істотно знижує матеріальні витрати. Часто лікар призначає комплексний аналіз ПЦР. Ціна обстеження, що складається з визначення шести збудників, становить близько 1500 рублів.

Рекомендації з підготовки до аналізу

Щоб результати були достовірними при проведенні дослідження ПЛР, здати аналіз потрібно, дотримуючись рекомендації по попередній підготовці до діагностики:

1. Перед здачею слини слід утриматися від прийому їжі і ліків за 4 години до забору матеріалу. Безпосередньо перед процедурою прополощіть рот кип`яченою водою.
2. Вищевказаними правилами потрібно керуватися і при взятті зразка з внутрішньої поверхні щоки. Після полоскання рекомендують провести легкий масаж шкіри для виділення секрету залози.
3. Сечу зазвичай збирають в домашніх умовах. Для цього потрібно провести ретельний туалет статевих органів. У стерильний пластиковий контейнер необхідно зібрати 50-60 мл сечі. Для забезпечення чистоти матеріалу рекомендується жінкам вставити тампон у піхву, а чоловікам максимально відтягнути шкірну складку. Не можна здавати матеріал в період менструальних виділень.
4. Для здачі сперми потрібно утриматися від статевого акту протягом 3 днів до забору матеріалу. Також лікарі радять відмовитися від відвідування сауни і прийняття гарячої ванни, вживання алкоголю та гострої їжі. За 3 години до аналізу потрібно утриматися від сечовипускання.
5. Для здачі урогенітального мазка, наприклад якщо проводиться аналіз на хламідії ПЛР, як жінкам, так і чоловікам рекомендується статевий спокій протягом 3 днів. За 2 тижні до аналізу не можна приймати антибактеріальні препарати. За тиждень треба припинити використання інтимних гелів, мазей, вагінальних свічок, спринцювання. За 3 години до дослідження потрібно утриматися від сечовипускання. Під час менструацій забір матеріалу не проводиться, лише через 3 дні після припинення кров`яних виділень можна взяти урогенітальний мазок.

ПЛР під час вагітності

У період очікування малюка багато інфекційних захворювань, що передаються статевим шляхом, є вкрай небезпечними для нормального розвитку плоду. ЗПСШ можуть спровокувати внутрішньоутробну затримку розвитку, викидень або передчасні пологи, вроджені вади дитини. Тому вкрай важливо пройти на ранніх термінах вагітності обстеження методом ПЛР. Здати аналіз необхідно при постановці на облік - до 12 тижнів.

Забір матеріалу відбувається з каналу шийки матки за допомогою спеціальної щіточки. Процедура безболісна і не представляє небезпеки для малюка. Зазвичай під час вагітності проводять аналіз на хламідії ПЛР-методом, а також на уреаплазмоз, мікоплазмоз, цитомегаловірус, герпес, папіломавірус. Такий комплекс обстеження називають ПЛР-6.

ПЛР для діагностики ВІЛ

У зв`язку з тим, що метод полімеразної ланцюгової реакції дуже чутливий до змін в організмі і умов проведення діагностики, багато факторів можуть вплинути на результат. Тому аналіз ПЦР на ВІЛ-інфекцію не є достовірним методом, його ефективність - 96-98%. В інших 2-4% випадків тест дає хибнопозитивні результати.

Але в деяких ситуаціях без ПЛР-діагностики ВІЛ не обійтися. Зазвичай її проводять людям з хибнонегативним результатом ІФА. Такі показники говорять про те, що у людини ще не виробилися антитіла до вірусу і їх неможливо виявити без багаторазового збільшення кількості. Саме цього можна досягти, провівши аналіз крові ПЛР-методом.

Також необхідна така діагностика дітям першого року життя, народженим від ВІЛ-позитивної матері. Метод є єдиним способом достовірного визначення статусу дитини.

ПЛР для діагностики гепатитів

Метод полімеразної ланцюгової реакції дозволяє виявити ДНК вірусу гепатитів А, В, С задовго до утворення антитіл до інфекції або появи симптомів хвороби. Особливо ефективним є аналіз ПЦР на гепатит С, так як в 85% випадків таке захворювання протікає безсимптомно і без своєчасного лікування переходить в хронічну стадію.

Своєчасне виявлення збудника допоможе уникнути ускладнень і тривалого лікування.

Комплексне обстеження ПЛР

Комплексний аналіз ПЦР: що це таке? Це обстеження методом полімезарной ланцюгової реакції, яке включає в себе визначення одночасно декількох видів інфекцій: мікоплазми геніталіум, мікоплазми хомініс, гарднерели вагіналіс, кандиди, трихомонади, цитомегаловірусу, уреаплазми уреалітікум, герпесу 1-го та 2-го типів, гонореї, папіломавірусу. Ціна такої діагностики коливається від 2000 до 3500 руб. в залежності від клініки, використовуваних матеріалів і устаткування, а також від виду аналізу: якісного або кількісного. Який необхідний у вашому випадку - вирішить лікар. В одних випадках достатньо лише просто визначити наявність збудника, в інших, наприклад при ВІЛ-інфекції, важливу роль відіграє кількісний титр. При діагностиці всіх перерахованих вище збудників обстеження називають «аналіз ПЦР-12».

Розшифровка результатів аналізу

Розшифровка аналізу ПЛР не представляє складності. Є лише 2 шкали показника - «позитивний результат» і «негативний результат». При виявленні збудника лікарі можуть з 99% -й упевненістю підтвердити наявність захворювання і приступити до лікування пацієнта. При кількісному методі визначення інфекції у відповідній графі буде вказано числовий показник виявлених бактерій. Тільки лікар може визначити ступінь захворювання і призначити необхідне лікування.

В деяких випадках, наприклад при визначенні ВІЛ-інфекції методом ПЛР, при негативному результаті виникає необхідність проведення додаткових обстежень для підтвердження отриманих показників.

Де здати аналіз?

Де здати ПЦР-аналіз: у державній поліклініці або в приватній лабораторії? На жаль, в муніципальних медичних установах апаратура і методи нерідко застарілі. Тому краще віддати перевагу приватним лабораторіям з сучасним обладнанням та висококваліфікованими кадрами. Крім того, в приватній клініці ви отримаєте результати значно швидше.

У Москві багато приватні лабораторії пропонують проведення аналізу ПЛР на різні інфекції. Наприклад, в таких клініках, як «Віта», «Комплексна клініка», «Щаслива сім`я», «Уро-Про», проводять аналіз ПЦР. Ціна обстеження становить від 200 руб. за визначення одного збудника.

Можна зробити висновок, що діагностика інфекційних захворювань методом ПЛР у більшості випадків є швидким і достовірним способом виявлення збудника в організмі на ранніх термінах інфікування. Але все ж у певних випадках варто вибрати інші способи діагностики. Визначити необхідність проведення такого дослідження може тільки фахівець. Розшифровка аналізу ПЛР також вимагає професійного підходу. Дотримуйтесь рекомендацій лікаря і не здавайте самостійно аналізи, в яких немає необхідності.